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微生物实验室培养基pH值监控的注意事项

日期:2021-04-10 人气:1190

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pH值是培养基的常规监控项目,微生物的生长不仅依赖丰富的营养,还需要在适宜的pH值范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性,因此培养基pH值是否符合要求直接影响微生物检验结果。

01、培养基的配制

配料—溶解—调PH—过滤—分装—包扎—灭菌—摆斜面—贮存

1.配料

配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。

2.溶解

淀粉溶解:少量冷水调成糊状

加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH

用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤

滤纸或棉花进行过滤。(有时可以省去)

5.分装

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶

若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,最多不能超过150ml培养基/250ml的

三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。

(2)试管分装

液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度;

固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。

6.包扎

分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养

基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。

8.摆斜面

灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。

9.贮存

培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用

注意事项:

在配制时,首先要确保培养基未结块、颜色未发生变化或其他物理性状明显改变;应按照使用说明上的要求操作,称量应达到相应的精确度;纯化水是配制培养基最常用的溶剂,应确保溶剂的质量符合要求;配制培养基应采用干净且不会对培养基理化特性产生改变的容器。

在分装前,应确保培养基完全溶解混匀,加热助溶是最常用的方法,应注意不要过度加热,尤其是含糖量较高的培养基,糖类不耐热的特性会使糖类在高温条件下产生有机酸而使pH值下降。

02、培养基的pH控制

培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。


虽然培养基中含有缓冲物质成分,能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内,但是配出的培养基若不符合要求,就要进行必要的调整。如果有已校准pH计,可用pH计,如果没有,可用精密的pH试纸,再根据需要用1 mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸(微调可用0.1氢氧化钠或0.1mol/L盐酸)调制所需的pH。培基的pH一般为7.4~7.6,也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基,在调整pH时要调至高出所需0.1个~0.2个单位,因用氢氧化钠调整时,高压灭菌后,培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分,可不pH。

03、pH电极的维护保养

目前,实验室使用pH计电极大部分都是复合电极。其优点是使用方便,不受氧化-还原物质的影响,且平衡速度快。使用时应注意以下事项:

⒈复合电极不用时,可充分浸泡饱和氯化钾溶液中。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗。

⒉使用前,检查玻璃电极前端的球泡。正常情况下,电极应该透明而无裂纹;球泡内要充满溶液,不能有气泡存在。

⒊测量浓度较大的溶液时,尽量缩短测量时间,用后仔细清洗,防止被测液粘附在电极上而污染电极。

⒋清洗电极后,不要用滤纸擦拭玻璃膜,而应用滤纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交叉污染,影响测量精度。

⒌测量中注意电极的银—氯化银内参比电极应浸入到球泡内氯化物缓冲溶液中,避免电计显示部分出现数字乱跳现象。使用时,注意将电极轻轻甩几下。

⒍电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。

⒎严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。

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